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ELISA试剂盒方法测定抗体操作步骤

点击次数:42 发布时间:2019-05-15

       在运用ELISA试剂盒方法测定抗体方面,通常所用的方法称为间接法,也是目前zui常用的方法,其原理:间接法首先用抗原包被于固相载体,这些包被的抗原必须是可溶性的,或者至少是极微小的颗粒,经洗涤,加入含有被测抗体之标本,再经孵育洗涤后,加入酶标记抗抗体,(对人的标本来说即加酶标抗人球蛋白IgG、IgM),再经孵育洗涤后,加底物显色,底物降解的量,即为欲测抗体的量,其结果可用目测或用分光光度计定量测定。

操作步骤:

1.将抗原按5 μg/ml稀释于碳酸盐缓冲液(pH 9.6),100 μl /孔,4℃过夜。

2.次日PBS-T清洗4次(快1慢3,间隔5分钟)。

3.加2%BSA封闭室温1 h,200 μl /孔。

4.PBS-T清洗4次(快1慢3,间隔5分钟)。

5.加入1:3000(不同公司有不同的推荐稀释度) PBS-T稀释的HRP标记的山羊抗人IgG,100 μl /孔,室温1h。

6.阳性对照从10ug/ml,做倍必稀释,待测血清从1:50做倍比稀释,预试验后确定稀释倍数及阳性对照的起始浓度及稀释数量(以可以做标准曲线为参数),室温1h。

7.PBS-T清洗4次(快1慢3,间隔5分钟)。

8.显色,100 μl /孔,颜色变深后中止显色,2M硫酸在BIO-RAD酶标仪上读数,可用ABTS,OPD,TMB等

 

 

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